人白脂素ELISA試劑盒的檢測程序和注意事項介紹

　　人白脂素ELISA試劑盒基于夾心法酶聯免疫吸附測定技術，將抗體預包被到96孔板上。將標準品，測試樣品和生物素偶聯試劑添加到孔中并孵育，然后加入結合了HRP的試劑，并孵育整個平板，在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結合的結合物。TMB底物用于定量HRP酶促反應，添加TMB底物后，只有含有足夠FBN1的孔才會產生藍色產物，然后在加入酸性終止液后變為黃色。

　　一、檢測程序：

　　1.加樣：空白孔加入50μl標準品/樣品稀釋液，其余孔各加入標準品或待測樣品50ul，將反應板混勻后置37℃，40分鐘。

　　2.洗板：用1×洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震蕩/浸泡1-2分鐘，向濾紙上印干。

　　3.空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液，其余孔各加入1×的生物素化抗體工作液100ul，混勻后置37℃，30分鐘。

　　4.洗板：同上。

　　5.每孔加入SABC復合物工作液100ul，混勻后置37℃，20分鐘。

　　6.洗板：同上。

　　7.每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混勻后置37℃暗處反應10-20分鐘。

　　8.每孔加入100ul終止液，混勻，30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

　　二、注意事項：

　　1.在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應做標準曲線。

　　2.洗滌過程很關鍵，洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高，從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結晶，屬于正?，F象，37℃水浴使結晶完全溶解后再配制洗滌液。

　　3.檢測時所有試劑都要恢復到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2個月內用完。

　　4.試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現絮狀物，屬正?，F象，不影響結果判讀。

　　5.人白脂素ELISA試劑盒保存在2-8℃，使用室溫平衡60分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F象，水浴加熱使結晶wan全溶解后再使用。樣本在使用也要在室溫平衡60分鐘。

　　6.實驗用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

　　7.液體組分使用充分搖勻。