人白脂素ELISA試劑盒基于夾心法酶聯免疫吸附測定技術,將抗體預包被到96孔板上。將標準品,測試樣品和生物素偶聯試劑添加到孔中并孵育,然后加入結合了HRP的試劑,并孵育整個平板,在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結合的結合物。TMB底物用于定量HRP酶促反應,添加TMB底物后,只有含有足夠FBN1的孔才會產生藍色產物,然后在加入酸性終止液后變為黃色。
一、檢測程序:
1.加樣:空白孔加入50μl標準品/樣品稀釋液,其余孔各加入標準品或待測樣品50ul,將反應板混勻后置37℃,40分鐘。
2.洗板:用1×洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,每孔加入1×洗液350μl,每次震蕩/浸泡1-2分鐘,向濾紙上印干。
3.空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液,其余孔各加入1×的生物素化抗體工作液100ul,混勻后置37℃,30分鐘。
4.洗板:同上。
5.每孔加入SABC復合物工作液100ul,混勻后置37℃,20分鐘。
6.洗板:同上。
7.每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul,混勻后置37℃暗處反應10-20分鐘。
8.每孔加入100ul終止液,混勻,30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
二、注意事項:
1.在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測,每次檢測都應做標準曲線。
2.洗滌過程很關鍵,洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高,從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結晶,屬于正?,F象,37℃水浴使結晶完全溶解后再配制洗滌液。
3.檢測時所有試劑都要恢復到室溫,板條開封后剩余板條需封好,放回袋中2個月內用完。
4.試劑盒使用超敏TMB溶液,若顯色過深會出現絮狀物,屬正?,F象,不影響結果判讀。
5.人白脂素ELISA試劑盒保存在2-8℃,使用室溫平衡60分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶wan全溶解后再使用。樣本在使用也要在室溫平衡60分鐘。
6.實驗用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
7.液體組分使用充分搖勻。